Leeming-Notman液體培養(yǎng)基基礎
培養(yǎng)基的種類有哪些？鑒別培養(yǎng)基：利用細菌分解糖類和蛋白質的能力及其代謝產物的不同，在培養(yǎng)基中加入特定的作用底物和指示劑，觀察細菌生長過程中分解底物所釋放的不同產物，通過指示劑的反應不同來鑒別細菌。例如糖發(fā)酵管、克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）、伊紅-亞甲藍瓊脂和動力-吲哚-尿素（MIU）培養(yǎng)基等。選擇培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入抑制劑，去抑制標本中的雜菌生長，有助于所選擇的細菌種類的生長。例如培養(yǎng)腸道致病菌的SS瓊脂，其中的膽鹽能抑制革蘭陽性菌，枸櫞酸鈉和煌綠能抑制大腸埃希菌，因而使致病的沙門菌、志賀菌容易分離到。培養(yǎng)基也有不同的形態(tài)，可以是液體、半固體或固體形式。Leeming-Notman液體培養(yǎng)基基礎
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基按成分分類有哪些？按用途分類：根據用途不同，培養(yǎng)基可分為基礎培養(yǎng)基、營養(yǎng)培養(yǎng)基、增菌培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、厭氧菌培養(yǎng)基等。基礎培養(yǎng)基(basic media) 大多數(shù)微生物共同需要的營養(yǎng)基礎。某--微生物如有特殊需要，可在此基礎上添加某種成分即可，如蛋白胨水、肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂等。1%蛋白胨水培養(yǎng)基便是一個較簡單的基礎培養(yǎng)基，該基礎培養(yǎng)基本身可供一般細菌增菌培養(yǎng)和靛基質試驗用，若再加入指示劑和糖類，則配成糖發(fā)酵培養(yǎng)基，供糖發(fā)酵試驗用，成為鑒別培養(yǎng)基；若在1%蛋白胨水中增加氯化鈉用量并將pH提高到8.6左右，則變成堿性蛋白胨水，用于霍亂弧菌的增菌培養(yǎng)，成為專門用的增菌培養(yǎng)基。S培養(yǎng)基微生物的供能方式會影響它對營養(yǎng)物質的利用，因此不同微生物需要不同成分的培養(yǎng)基。
要獲得微生物純培養(yǎng)，必須避免雜菌污染，因此對所用器材及工作場所進行消毒與滅菌。對培養(yǎng)基而言，更是要進行嚴格的滅菌。對培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養(yǎng)基用1.05kg/cm2，121.3℃條件下維持15-30min可達到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過程中，長時間高溫會使某些不耐熱物質遭到破壞，如使糖類物質形成氨基糖、焦糖，因此含糖培養(yǎng)基常在0.56kg/cm2，112.6℃15-30分鐘進行滅菌，某些對糖類要求較高的培養(yǎng)基，可先將糖進行過濾除菌或間歇滅菌，再與其他已滅菌的成分混合。
培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內，以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產生代謝產物。各類微生物生長繁殖或產生代謝產物的較適pH條件各不相同，一般來講，細菌與放線菌適于在pH7-7.5范圍內生長，酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范圍內生長。值得注意的是，在微生物生長繁殖和代謝過程中，由于營養(yǎng)物質被分解利用和代謝產物的形成與積累，會導致培養(yǎng)基pH發(fā)生變化，若不對培養(yǎng)基pH條件進行控制，往往導致微生物生長速度下降或（和）代謝產物產量下降。因此，為了維持培養(yǎng)基pH的相對恒定，通常在培養(yǎng)基中加入pH緩沖劑，常用的緩沖劑是一氫和二氫磷酸鹽（如KH2PO4和K2HPO4）組成的混合物。K2HPO4溶液呈堿性，KH2PO4溶液呈酸性，兩種物質的等量混合溶液的pH為6.8。當培養(yǎng)基中酸性物質積累導致H+濃度增加時，H+與弱堿性鹽結合形成弱酸性化合物，培養(yǎng)基pH不會過度降低；如果培養(yǎng)基中OH-濃度增加，OH-則與弱酸性鹽結合形成弱堿性化合物，培養(yǎng)基pH也不會過度升高。培養(yǎng)基是一種含有必需營養(yǎng)物質的生長介質，用于細胞、細菌的培養(yǎng)和繁殖。
血清的主要成分血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機物等，這些物質對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。血清主要作用：提供基本營養(yǎng)物質：氨基酸、維生素、無機物、脂類物質、核酸衍生物等，是細胞生長必須的物質。培養(yǎng)基是一種營養(yǎng)物質混合物，可以為細胞提供生長所需的物質。SCCRAM 肉湯
無機培養(yǎng)基則為化學合成培養(yǎng)基，其用途從分離細菌到研究微生物生理生化特性都普遍應用。Leeming-Notman液體培養(yǎng)基基礎
在培養(yǎng)基中加入 HEPES 有何好處?培養(yǎng)基中常用的緩沖體系是碳酸氫鹽，它可提供營養(yǎng)，但卻在生理 pH 條件下會降低緩沖能力。而HEPES 是一種很強的緩沖劑，能使細胞培養(yǎng)基在 pH7.2-7.6 條件下緩沖能力增強。HEPES溶液：是一種弱酸，中文名字是羥乙基哌秦乙硫磺酸，主要作用是防止培養(yǎng)基pH迅速變動。在開放式培養(yǎng)條件下，觀察細胞時培養(yǎng)基脫離了 5%CO2 的環(huán)境，CO2 氣體迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此時可以維持 pH7.0 左右。一般在進行克隆化培養(yǎng)時要添加HEPES。神經細胞原代培養(yǎng)的過程中能用到。Leeming-Notman液體培養(yǎng)基基礎
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三維膠原的制備：鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中，在成膠過程中需要加入0.06X體積 。
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